Сифилис – заболевание инфекционной природы, обусловленное спирохетой Treponema pallidum, склонное к прогредиентному хроническому течению, с чёткой периодизацией клинической симптоматики.
Преобладание полового пути передачи над контактным и трансплацентарным ставит это заболевание в ряд венерических (ЗППП, ИППП). Помимо указанных способов передачи инфекции особую роль играет артифициальный путь (от лат. «artificio» — искусственно созданный).
Он характерен для медицинских учреждений, в основном, реализуется в условиях стационара. Инфицирование происходит при гемотрансфузиях, различных хирургических операциях, инвазивных диагностических методах.
Несмотря на карантинизацию донорской крови, проблема выявления сифилиса у доноров на разных стадиях заболевания все ещё актуальна.
Поэтому диагностические мероприятия при сифилисе требуют стандартизации, внедрения новых чувствительных и информативных методов идентификации, а также сведения к минимуму ошибок и неправильной трактовки результатов анализов.
Классификация методов лабораторной диагностики
Диагностика сифилиса имеет некоторые особенности и отличается от диагностики других бактериальных инфекций. Сложное строение и антигенные свойства бледной трепонемы обусловливают ошибки в интерпретации результатов серологических реакций.
Сдать анализ крови на сифилис предлагают 3 основным группам пациентов:
- 1Скрининг и диспансеризация групп населения (в том числе и беременность, постановка на учет в женской консультации, поступление на работу и оформление медкнижки и так далее).
- 2Скрининг в группах риска (незащищенные половые контакты с человеком, инфицированным сифилисом, лица после принудительных сексуальных контактов, ВИЧ-инфицированные и так далее).
- 3Лица, имеющие симптомы заболевания, или лица с подозрением на сифилитическую инфекцию.
Все лабораторные методы условно подразделяют на прямые и непрямые.
1.1. Прямые методы
- 1Идентификация Treponema pallidum в тёмном поле (темнопольная микроскопия).
- 2Заражение подопытных животных (культивирование в лабораторных животных).
- 3ПЦР (полимеразно-цепная реакция).
- 4ДНК-зонд или гибридизация нуклеиновых кислот.
1.2. Непрямые методы
Серологические реакции — это методы лабораторной диагностики, базирующиеся на обнаружении антител (сокращенно АТ) к антигенам бледной трепонемы (сокращенно АГ). Они имеют основное значение для подтверждения диагноза.
- 1Нетрепонемные тесты:
- Реакция Вассермана (РСК);
- Реакция микропреципитации (МР, РМП) и ее аналоги, которые приведены ниже;
- Тест быстрых плазменных реагинов (RPR, РПР);
- Тест с красным толуидином и сывороткой (TRUST);
- Нетрепонемный тест Лаборатории исследования венерических болезней — VDRL.
- 2Трепонемные тесты:
- Р-ция иммобилизации Treponema pallidum – РИБТ/РИТ;
- Р-ция иммунофлюоресценции – РИФ, FTA (разведения сывороток РИФ-10, РИФ-200, РИФ-абс);
- Р-ция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРПГА, TPHA);
- Иммуноферментный анализ (ИФА, EIA);
- Иммуноблоттинг.
Рисунок 1 — Алгоритм серодиагностики сифилиса
1.3. Гистоморфологические методы
Эти методы сводятся к выявлению особенностей гистоморфологии сифилитических проявлений. Внимание уделяется тонкостям строения твёрдого шанкра. Однако, дифференциальная диагностика инфекции с помощью гистологии весьма затруднительна. Гистоморфология используется с другими лабораторными и клиническими тестами.
Динамика антителообразования при сифилисе.
Несмотря на тенденцию к снижению заболеваемости сифилисом в Российской Федерации, проблема эпидемиологии заболевания сохраняет актуальность. Отмечается преобладание скрытых форм, регистрируются случаи врожденного сифилиса, растет число случаев нейросифилиса как в России в целом, так и в отдельных субъектах, в том числе в Москве [1].
Значимое место в контроле над распространением сифилитической инфекции занимает диагностика, осуществляемая лабораторными методами. Она особенно важна при скрытых формах заболевания, при необходимости раннего установления диагноза, предупреждения развития врожденного сифилиса, а также поздних форм инфекции.
В России в настоящее время абсолютный приоритет в диагностике сифилиса занимают серологические методы исследования, среди которых выделяют нетрепонемные (НТТ) и трепонемные (ТТ) тесты.
Все современные НТТ представляют собой флоккуляционные тесты, в качестве антигена в которых применяют кардиолипин-лецитин-холестероловый комплекс, представляющий собой антиген нетрепонемного происхождения.
НТТ — реакция микропреципитации с плазмой и инактивированной сывороткой (РМП), тест быстрых плазменных реагинов (RPR), тест исследовательской лаборатории венерических заболеваний (VDRL) и др. — применяют для скрининга
населения на сифилис, контроля эффективности терапии (по титру антител в парных сыворотках, полученных до и после лечения) и определения активности инфекции (по высоте титра антител).
В ТТ применяют антиген трепонемного происхождения — патогенную бледную трепонему как цельноклеточную, так и в виде рекомбинантных белков или синтетических пептидов.
Современные ТТ — иммуноферментный анализ (ИФА), реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) и ее аналоги, реакцию иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноблоттинг (ИБ), иммунохемилюминесценцию (ИХЛ), простые быстрые тесты у постели больного (ПБТ), реакцию иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) — применяют для подтверждения
положительных результатов НТТ и
скрининга
населения на сифилис (ИФА, РПГА, простые быстрые тесты).
Поскольку серологическая диагностика сифилиса является в настоящее время наиболее востребованной и включает спектр разнообразных методов исследования, при их использовании возникает ряд проблем, нередко ставящих в тупик дерматовенерологов. Среди них можно выделить три основные группы:
1. ошибки диагностики, допускаемые на различных этапах выполнения исследования
;
2. ложноположительные (ЛПР) или биологические ложноположительные реакции (БЛПР);
3. несовпадение результатов отдельных исследований.
Ошибки диагностики, допускаемые на различных этапах выполнения исследования,
как правило, связаны с нарушениями, допускаемыми на преаналитическом, аналитическом и постаналитическом этапах исследования. В настоящее время установлено, что до 60—70% ошибок диагностики совершается на
преаналитическом
этапе исследования1 , за который отвечают в основном
работники клиники
(врачи, медицинские сестры) [2—7].
Ошибки, допускаемые на преаналитическом этапе, могут быть связаны с неправильной подготовкой больного к исследованию или с тестированием сывороток крови, не пригодных к исследованию.
Следует помнить о том, что кровь от больного с подозрением на сифилис должна быть получена натощак. Накануне исследования больной не должен употреблять алкоголь, лекарственные и наркотические препараты. Не производят забор крови от лихорадящих больных, женщин в период менструации и в первую неделю после родов.
Запрещается использовать для исследования сыворотки крови с признаками гемолиза, бактериального пророста, а также хилезные (жирные, молочно-белого цвета) сыворотки, так как их исследование может привести к ложным результатам.
На аналитическом этапе исследования2 , за который несут ответственность работники лаборатории, причиной ошибок может стать:
— низкая квалификация сотрудников лаборатории и несоблюдение инструкций по применению наборов реагентов;
— отсутствие внутрилабораторного контроля качества исследований и практики внешнего контроля качества исследований в лаборатории;
— неправильное хранение биологического материала (сыворотки крови до исследования на сифилис должны храниться в условиях бытового холодильника при температуре 4–8°С не более 74 ч; более длительное хранение возможно при температуре –15°С и ниже; при этом допускается лишь однократное
замораживание/размораживание замерзших сывороток крови перед исследованием);
— неправильное хранение наборов реагентов до проведения исследования — на наборах реагентов (в инструкциях или коробках для наборов) указывается срок годности, условия хранения (в условиях бытового холодильника, при комнатной температуре, замороженными при низкой температуре). Нарушение этих условий приводит к порче наборов и потере диагностической активности.
Критичными факторами, приводящими к возникновению ошибок на постаналитическом этапе3 исследования, являются:
— низкий уровень подготовки работников клиники, которые не знают о современных тестах на сифилис и не умеют их правильно интерпретировать;
— отсутствие или низкое качество системы менеджмента качества в учреждении, когда возможны ошибки вследствие неправильной маркировки пробирок, неправильного заполнения бланков с результатами исследований, ошибки при занесении результатов исследований в лабораторный журнал, историю болезни или амбулаторную карту, утрата результатов исследований.
ЛПР или БЛПР
могут быть связаны с низким качеством диагностикумов (низкой чувствительностью и специфичностью), но могут быть также обусловлены и другими причинами.
Одной из вероятных причин ложноположительных тестов на сифилис являются технические погрешности, сопровождающие сбор, доставку, хранение образцов сыворотки крови и постановку серологических реакций на сифилис; нарушения, связанные с хранением ингредиентов реакций, несоблюдением инструкций при выполнении исследований и работе на соответствующем оборудовании.
БЛПР, регистрируемые у лиц, не страдающих сифилисом, с помощью НТТ, возможны при ВИЧ-инфекции, гепатите C, беременности, в пожилом возрасте пациентов, при тяжелой соматической патологии (в том числе эндокринной, онкопатологии, заболеваниях сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта, легких, при некоторых дерматозах) [8—16].
БЛПР можно разделить на острые (регистрируются в сроки до 6 мес с момента выявления) и хронические (более 6 мес). Острые БЛПР наблюдаются, как правило, при острых инфекциях вирусной и бактериальной природы, после вакцинации. Хронические БЛПР могут наблюдаться при заболеваниях аутоиммунной, эндокринной природы, онкологических процессах, лепре, хронических заболеваниях печени, других (как правило, хронических) заболеваниях, при инъекционном применении наркотиков, в старческом возрасте.
ЛПР обнаруживаются также при эндемичных трепонематозах и спирохетозах. Однако эти случаи вряд ли можно отнести к «ложноположительным». Трепонематозы и спирохетозы вызываются бактериями, относящимися к группе спирохет, включающей Borrelia, Spirochaeta, Leptospira, Treponemа pertenue
(фрамбезия/фрамбезия тропическая),
T. carateum
(пинта),
Т. pallidum
подвид
endemicum
(беджель). Антитела к возбудителям при этих заболеваниях по своему составу близки к антителам к
T. рallidum
и определяются теми же методами [17].
Для дифференциации ложного и истинного характера серопозитивности НТТ применяются ТТ.
Однако серологические ЛПР на сифилис могут наблюдаться и при постановке Т.Т. Так, положительные результаты ИФА и РПГА отмечены у пациентов с инфекционным мононуклеозом, у наркоманов, больных коллагенозами, у лиц со злокачественными новообразованиями, у пациентов с эндокринной патологией. В этих случаях отличить истинные реакции и ложные бывает затруднительно, потому что сифилис может сочетаться с вышеперечисленными заболеваниями. Положительные результаты ТТ могут также наблюдаться у пациентов пожилого возраста [18—21].
Для дифференциальной диагностики между БЛПР и ранним скрытым сифилисом (РСС) могут быть использованы следующие подходы:
— проведение комплекса лабораторных исследований (НТТ, несколько ТТ);
— получение полноценных сведений о пациенте и его половых партнерах, включая не только клинико-анамнестические, но и социально-эпидемиологические данные;
— проведение новых, высокотехнологичных исследований.
Для дифференциальной диагностики между БЛПР и РСС могут быть использованы дифференциально-диагностические критерии, включающие как серологические и клинико-анамнестические показатели, так и социально-эпидемиологическую характеристику пациентов [22].
Так, для БЛПР более характерна регистрация низких титров НТТ (≤1:4), отрицательные или слабоположительные результаты ТТ, колебания значений тестов при их повторении в одной лаборатории, спонтанное (без антибиотикотерапии) снижение титров или негативация серореакций; из клинико-анамнестических показателей — отсутствие анамнестических указаний на высыпания в области гениталий в пределах 2 лет до обращения, отсутствие увеличенных паховых лимфоузлов, отсутствие указаний на сифилис и объективных данных, свидетельствующих о сифилисе у полового партнера; из социально-эпидемиологических показателей — возраст пациентов старше 40 лет, наличие соматической патологии, поздний сексуальный дебют (после 20—25 лет), моногамные половые отношения, наличие постоянной работы.
Для больных РСС более характерны высокие титры НТТ (≥1:8), резко положительные результаты ТТ в полном комплексе, стабильные (положительные) значения тестов, снижение титров или негативация серореакций после специфической терапии; из клинико-анамнестических показателей — анамнестические указания на высыпания в области гениталий в пределах 2 лет до обращения, наличие увеличенных паховых лимфоузлов (чаще одностороннее), данные конфронтации — половой контакт с больным сифилисом; из социально-эпидемиологических показателей — возраст пациентов моложе 20 лет, отсутствие соматической патологии, ранний (до 13—15 лет и раньше) сексуальный дебют, беспорядочные половые связи, множество половых партнеров, отсутствие постоянной работы.
Несовпадение результатов отдельных исследований
.
Данная проблема волнует дерматовенерологов достаточно давно, и связана в первую очередь с комплексностью серодиагностики сифилиса. В особенности же она обострилась после того как в практику дерматовенерологических учреждений стали внедрять реверсионный алгоритм диагностики сифилиса, начинающийся с использования ТТ (в отличие от традиционного алгоритма, начинающегося с НТТ) [23]. При этом появилась масса необъяснимых случаев с расхождением результатов отдельных тестов. В основном же это касалось случаев с положительными результатами ТТ и с отрицательными НТТ, которые регистрировались среди категорий пациентов, не относящихся к так называемым «ядерным»4 группам (соматические больные, беременные, доноры).
Так чем же может быть обусловлено расхождение результатов серологических тестов?
Одной из причин расхождения результатов серологических реакций на сифилис могут быть различия сроков их позитивации и негативации, связанные с особенностями развития иммунного ответа при сифилисе
(рисунок).
Как известно, первыми в крови больных сифилисом начинают обнаруживаться трепонемоспецифические антитела, относящиеся к IgМ
. Они появляются в рамках развития первичного иммунного ответа, начиная со 2-й недели после заражения, могут регистрироваться уже в периоде инкубации, далее их количество нарастает, достигая максимума на 6—9-й неделе после заражения, после чего постепенно падает [24—26]. Трепонемоспецифические
IgM
регистрируются в таких реакциях, как ИФАIgM, РИФIgM, 19SIgM-FTAabs, IgM-иммуноблоттинг.
Трепонемоспецифические IgG
начинают появляться в крови больного сифилисом примерно с 4-й недели после заражения. Количество их достигает максимума при вторичном сифилисе, а также при РСС, и может оставаться на высоком уровне в течение всей оставшейся жизни пациента, когда-либо перенесшего сифилис, что служит основанием для ретроспективной диагностики сифилиса. Трепонемоспецифические
IgG
определяются в таких реакциях, как ИФАIgG, IgG-иммуноблоттинг, РПГА, РИТ, РИФ.
РИБТ — один из старейших, «классических» тестов сифилидологии, до сих пор используемый в России, становится позитивным примерно со второй половины первичного периода сифилиса и далее может остаться положительным всю оставшуюся жизнь у пациента, перенесшего сифилис, в особенности начиная со вторичной стадии [27].
Антитела, определяемые в НТТ (антитела против липоидных антигенов бледной трепонемы), также как и в РИБТ, определяются в крови со второй половины первичного периода сифилиса; их концентрация достигает максимума при вторичном и РСС, а далее, при продвижении сифилиса к поздним стадиям (третичный, висцеральный, поздний нейросифилис), могут спонтанно элиминироваться, а НТТ — стать отрицательными.
В этой связи нет ничего удивительного в том, что результаты отдельных серологических тестов на разных стадиях сифилитической инфекции могут не совпадать.
Существует эффект (или период) так называемого серологического окна, известный для многих инфекций [28, 29]. При сифилисе он включает период инкубации и начала первичного сифилиса, когда твердый шанкр в виде эрозии или язвы уже появился, а серологические реакции, регистрирующие наличие антител-реагинов к липоидным антигенам бледной трепонемы, еще отрицательные. Однако положительными при этом могут быть другие трепонемные «ранние» реакции, в частности, ИФАIgM, РИФIgM, 19SIgM-FTAabs, IgM-иммуноблоттинг, а также (у некоторых пациентов) — РИФ.
Известен так называемый феномен, или эффект прозоны
, когда у больного с «цветущим» сифилисом (вторичный, РСС) наблюдается отрицательный результат серологических реакций на сифилис (в частности, НТТ) ввиду конкуренции антител с разной валентностью за сайты связывания с антигеном; при этом может наблюдаться блокада антигенных детерминант и парадоксально отрицательный результат реакции [30—35]. Выходом из данной ситуации является разведение сыворотки крови и ее повторное тестирование в разведениях (титры).
Отрицательные результаты серологических тестов (всех или частично) на сифилис могут быть обусловлены иммуносупрессией
, сопровождающей ВИЧ-инфекцию, а также другие заболевания/состояния, связанные с развитием иммуносупрессии (например, получение больным химиотерапии по поводу онкологического заболевания) [36]. Выход в данной ситуации заключается в подробном изучении анамнеза пациента, их обследовании на ВИЧ-инфекцию, постановке более чувствительных серологических реакций и применении прямых методов исследования.
Несовпадение результатов серологических реакций может наблюдаться ввиду разной аналитической чувствительности тестов
5 . К настоящему времени разработаны серологические тесты, обладающие очень высокой аналитической чувствительностью: например, диагностикумы для иммуноблоттинга и РПГА, чувствительность которых, по данным литературы, значительно выше, чем у РИФабс., которая считается общепризнанной реакцией-арбитром [37].
Наконец, несовпадение результатов серологических реакций может наблюдаться ввиду разной природы и состава входящих в них антигенов
и соответственно определяемых антител. Так, например, в НТТ мы определяем антитела к кардиолипиновому антигену — антифосфолипидные иммуноглобулины, в ИФА — антитела к антигенам белковой природы или липопротеинам. При одновременной постановке результаты исследований в разных реакциях могут не совпадать.
Варианты сочетаний нетрепонемных и трепонемных серологических тестов
В клинической практике могут встречаться различные сочетания результатов НТТ и ТТ, интерпретация которых иногда вызывают затруднение.
Итак, классические сочетания. Когда это может наблюдаться?
НТТ — отрицательный, ТТ — положительный.
Такое сочетание значений тестов может наблюдаться:
— в начале первичного периода сифилиса — в период «серологического окна», т. е. в первые 2—3 нед после появления твердого шанкра, когда НТТ еще не позитивировались, а ТТ (в особенности IgM
-варианты тестов) уже положительные;
— в случае позднего нелеченного сифилиса, если НТТ спонтанно негативировались (это происходит в 20—40% случаев);
— при раннем сифилисе, успешно пролеченном (может наблюдаться всю оставшуюся жизнь пациента, в особенности, если он получал лечение по поводу сифилиса вторичного или РСС);
— при ложноположительном результате ТТ; в этом случае наблюдается, как правило, низкий уровень серопозитивности ТТ; следует повторить исследование в той же лаборатории с той же тест-системой.
НТТ и ТТ положительные.
Казалось бы, это совершенно понятная ситуация, свидетельствующая о наличии у пациента сифилиса. Однако возможны и другие варианты. Данная ситуация также может наблюдаться:
— после получения больным сифилисом адекватного лечения раннего сифилиса (в пределах 1—1,5 лет после окончания лечения сифилиса, как правило, при замедленной негативации серологических реакций), но может сохраняться и всю оставшуюся жизнь пациента, в особенности, если он получал лечение по поводу сифилиса вторичного или РСС;
— в случае пролеченного позднего сифилиса (серологические реакции при этом могут навсегда остаться положительными);
— при трепонематозах и спирохетозах (пинта, педжель, боррелиоз, возвратный тиф), если инфекции вызваны возбудителями, имеющими антигенное сходство с T. pallidum
;
— в случае регистрации ложноположительных результатов серологических реакций (злокачественные новообразования, аутоиммунные заболевания, заболевания желудочно-кишечного тракта, тяжелые хронические инфекции); при этом регистрируют, как правило, низкие титры серореакций, но могут быть и высокие.
НТТ — положительный, ТТ — отрицательный.
Как правило, это классическая ситуация для ложноположительных результатов НТТ на сифилис. Вместе с тем такое сочетание возможно при первичном сифилисе (когда использовался
IgG
вариант ТТ, например, РПГА, РИБТ, которые еще не успели позитивироваться) и в случае пролеченного сифилиса при низкой концентрации антитрепонемных антител.
НТТ и ТТ отрицательные.
Данная ситуация может наблюдаться:
— если пациент никогда не болел сифилисом;
— в период инкубации и в начале первичного периода сифилиса;
— при сифилисе у пациента с выраженной иммуносупрессией (ВИЧ-инфекция, предшествующая химиотерапия по поводу злокачественного новообразования);
— в случае эффекта «прозоны» у больного вторичным, РСС (множество антител, конкурирующих за сайты связывания с антигеном);
— пациент получил лечение по поводу первичного сифилиса.
Клинические ситуации при диагностике сифилиса методами ИФА и РМП
Практика показывает, что в Российской Федерации для диагностики сифилиса наиболее часто применяют технологию ИФА в сочетании с НТТ (РМП, RPR). Это обусловлено наличием большого выбора ИФА-тест-систем, предлагаемых отечественными и зарубежными производителями, удобством проведения исследований методом ИФА «на потоке», в крупных лабораториях (централизованных и лабораториях кожно-венерологических диспансеров). Вместе с тем использование различных вариантов ИФА (с определением суммарных антител ИФАсат, а также ИФА-IgM, ИФА-IgG) нередко приводит к трудностям в интерпретации получаемых результатов. Поэтому остановимся на наиболее часто встречающихся ситуациях.
Начальный период сифилитической инфекции.
В ранней стадии инфекции (инкубация, начало первичного сифилиса) у пациентов может быть зарегистрирована как положительная (как правило, в низком титре), так и отрицательная РМП, позитивный результат определения суммарных антител (САТ) и
IgM
методом ИФА. Результат определения
IgG
-антител может быть при этом положительным в низком титре (с низким коэффициентом позитивности), либо отрицательным. Результаты серологического тестирования при этом могут выглядеть следующим образом:
РМП ±, ИФАсат +; М+; G ±
.
Начальный период сифилитической инфекции характеризуется, как правило, выработкой «ранних» трепонемоспецифических IgM
-антител и может быть пропущен при отрицательном результате РМП и отсутствии должной настороженности со стороны дерматовенеролога. Важным моментом, позволяющим избежать ошибку, может стать постановка ИФА по клинико-эпидемиологическим показаниям (указание на половой контакт с больным заразной формой сифилиса, наличие первичного аффекта), а также повторение исследования через 5—7 дней с новой порцией крови. Воспроизведение полученных результатов либо позитивация РМП и IgG–ИФА будут в этом случае дополнительным подтверждением в пользу сифилиса.
Период «разгара» инфекции
.
Имеется в виду вторичный сифилис, когда в крови больного сифилисом регистрируют антитела, определяемые в ТТ и НТТ. Как правило, этот период сомнений не вызывает, сопровождается клиническими проявлениями и следующей серологической картиной:
РМП+; ИФАсат +; М+; G+.
При недостаточно высокой чувствительности ИФА-IgM-тест-систем могут наблюдаться следующие результаты серологических тестов: РМП+; ИФАсат +; М–; G+.
В редких случаях при переизбытке антител, может наблюдаться «феномен прозоны» — парадоксально отрицательный результат, как правило, НТТ. В этом случае может быть получен следующий вариант серологического тестирования: РМП–; ИФАсат +;
М+; G+.
В такой ситуации следует поставить РМП в разведениях сыворотки крови с определением титра.
Дифференциальная диагностика РСС и БЛПР.
Наиболее трудным для диагностики, особенно при отсутствии манифестных проявлений инфекции, низких титрах РМП, низком коэффициенте позитивности ИФАсат, отрицательном IgM-ИФА, а также невозможности тестирования на содержание IgG-АТ и «отрицательном» (в плане сифилиса) анамнезе пациентов является следующее сочетание результатов:
РМП+; ИФАсат+; М–; G+.
В данном случае должна осуществляться дифференциальная диагностика между РСС и БЛПР. Диагностическим для РСС при этом будет высокий титр трепонемоспецифических IgG (≥1:1600) [22]. Существенную помощь при установлении диагноза могут оказать клинико-анамнестические данные.
Поздний сифилис. Ретроспективный диагноз.
В позднем периоде инфекции РМП может быть отрицательной, слабоположительной, либо положительной в низком титре; ИФА же, напротив, обычно бывает положительным. При этом мы вправе ожидать позитивных результатов при определении методом ИФА суммарных антител, а также
IgG
в высоком титре или с высоким коэффициентом позитивности. Уровень
IgM
-антител с переходом инфекции в позднюю стадию, как правило, падает, в связи с чем ожидаемым будет следующее сочетание:
РМП–;
ИФАсат+; М–; G+, высокий титр (высокий коэффициент позитивности).
Аналогичная комбинация результатов исследований может наблюдаться и в случае леченного сифилиса,
при необходимости подтвердить ретроспективный диагноз. Вместе с тем ввиду проведенного лечения титры
IgG
(и коэффициент позитивности) могут быть средними или низкими, либо вообще реакция на
IgG
-антитела будет отрицательной. Ожидаемый результат при этом будет выглядеть следующим образом:
РМП–; ИФАсат±; М–; G±
(средний, низкий титр или коэффициент позитивности).
Ранний врожденный сифилис. ЛПР новорожденных.
Классическая комбинация результатов серореакций при раннем врожденном сифилисе будет следующей:
РМП+; ИФАсат+; М+; G+
(M и G-высокий титр или коэффициент позитивности)
Ввиду недостаточной чувствительности тест-систем, выявляющих IgM
-антитела, результат их определения может оказаться отрицательным, что еще не исключает ранний врожденный сифилис у ребенка. Помочь в установлении диагноза при этом могут результаты определения титров
IgG
-антител в динамике и сопоставление результатов обследования ребенка с результатами матери [38].
Высокие титры РМП и IgG—
ИФА без тенденции к снижению в течение ближайших 6 мес после родов, превышающие аналогичные показатели матери, свидетельствуют в пользу раннего врожденного сифилиса. Комбинация результатов при этом может выглядеть следующим образом:
РМП+; ИФАсат+; М–; G+
(высокий титр или коэффициент позитивности без тенденции к снижению в течение 6 мес после рождения, титры антител у ребенка выше, чем у матери).
Низкие титры или слабоположительные результаты РМП наряду с отрицательными данными IgM-ИФА, низким титром или низким коэффициентом позитивности IgG—
ИФА, сопровождающимися спонтанной негативацией в течение 6 мес после родов и более низкими значениями, чем у матери, свидетельствуют в пользу ложной позитивности серореакций у ребенка. Комбинация результатов при этом будет выглядеть следующим образом: РМП+(слабо+; низкие титры); ИФАсат+; М–; G+ (низкие титры, низкий коэффициент позитивности; спонтанная негативация РМП в течение 6 мес. после рождения; титры АТ у ребенка ниже, чем у матери).
Рецидив, реинфекция.
Возникновение клинико-серологического, либо только серологического рецидива после пролеченной инфекции сопровождается возвратом прежних симптомов, к числу которых относится прежде всего положительная сероконверсия. Комбинация результатов серореакций при этом выглядит следующим образом:
РМП+; ИФАсат+; М–; G+ — рецидив.
В случае реинфекции картина скорее всего будет следующей: РМП+; ИФАсат+; М+; G+ — реинфекция.
Дифференцировать рецидив и реинфекцию можно на основании клинико-анамнестических и серологических критериев (таблица).
Клинико-анамнестические и серологические критерии дифференциальной диагностики рецидива и реинфекции
Клинико-серологический контроль после лечения сифилиса
.
Основным критерием качества терапии сифилиса в настоящее время является интенсивность снижения титров РМП в течение первого года наблюдения [23]. Об эффективности терапии свидетельствует 4-кратное снижение титров РМП в сравнении с первоначальными (до лечения) данными. Результаты ИФА при этом не учитываются.
Об удовлетворительных результатах лечения могут говорить следующие сочетания:
— РМП–; ИФАсат–;
— РМП–; ИФАсат+; М–; G-;
— РМП–; ИФАсат+; М–; G+
Комбинация: РМП+; ИФАсат+; М–; G+
у леченного пациента с постепенным снижением титров РМП (в течение 1,5—2 лет после лечения) говорит в пользу замедленной негативации серореакций и целесообразности наблюдения за больным без активного вмешательства в его судьбу (т.е. без дополнительного лечения антибиотиками).
Аналогичное сочетание у леченного пациента при неизменном титре РМП, отсутствии IgM-АТ и наличии IgG-АТ может свидетельствовать о следовом характере процесса (иммунологическая память, идиотип-антиидиотипические взаимодействия) и не требует подключения антибиотиков [39].
Сочетание РМП+; ИФАсат+; М+; G+
у леченного пациента при неизменном титре РМП, наличии определяющихся IgM и IgG-АТ может свидетельствовать о сохранении в организме пациента патогенной бледной трепонемы и требует подключения антибиотиков.
Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о том, что проблемы в серологической диагностике сифилиса существуют. Это обусловлено многообразием применяемых тестов, различиями в их чувствительности и специфичности, комплексностью диагностики и другими причинами. Вместе с тем эти проблемы нельзя считать неразрешимыми. Залогом успешного решения проблем серодиагностики сифилиса является знание закономерностей иммунологического ответа при данной инфекции, а также знание особенностей различных тестов, тактики их использования, правильность интерпретации и, несомненно, наличие клинического мышления у специалистов-дерматовенерологов и врачей клинической лабораторной диагностики.
Преаналитический этап включает сбор врачом анамнеза пациента, оценку клинической симптоматики, а также подготовку больного к обследованию, сбор, хранение и доставку биологического материала.
Аналитический этап подразумевает проведение исследований в лаборатории.
Постаналитический этап подразумевает регистрацию результатов исследований в лабораторных журналах или в электронном виде, клиническую интерпретацию результатов и установление диагноза с использованием полученных результатов.
Ядерные группы — группы пациентов с высоким риском заражения ИППП вообще и сифилиса в частности. К ядерным группам в настоящее время относят работников коммерческого секса, мужчин, имеющих секс с мужчинами, лиц, злоупотребляющих алкоголем, лиц, употребляющих наркотики внутривенно, подростков с девиантным поведением.
Аналитическая чувствительность — способность метода обнаруживать минимальное количество искомого вещества или наименьшие различия между двумя концентрациями исследуемого вещества.
Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле
Этот метод основывается на непосредственном обнаружении бледной трепонемы в исследуемом материале с помощью микроскопа и специальных приспособлений (чаще всего отделяемое эрозий и язв, реже спинномозговая жидкость и другие субстраты).
С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.
Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.
Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.
Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).
На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.
В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.
Рисунок 2 — Темнопольная микроскопия как способ визуализации бледной трепонемы в исследуемом материале. Источник иллюстрации — CDC
Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.
Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.
Периоды сифилиса
В период первых трех, иногда шести недель с момента поражения организма инфекцией, симптомы сифилиса могут не проявляться. Такой период называют инкубационным. Выделяют еще три периода протекания заболевания сифилиса: первичный, вторичный и третичный.
Признаками первичного сифилиса является возникновение язвы (твердого шанкра) на пораженных органах (в основном на слизистых рта, половых органах и прямой кишке) и воспаление лимфатических узлов. Шанкру, по истечению 3-6 недель, свойственно сходить с поверхности слизистой или кожи самостоятельно.
По истечению 3-4 месяцев наступает вторичный период сифилиса. Вторичному периоду характерны следующие симптомы: сыпь, повышенная температура, головная боль, выпадение волос, характерное разрастание телесного цвета.
В стадию третичного сифилис переходит в случае отсутствия лечения вторичного, по истечению многих лет после заражения. Третичный сифилис страшен своими последствиями. Третичный сифилис поражает все органы, опорно-двигательную, сердечно-сосудистую, нервную (спинной и головной мозг) системы. Происходят необратимые изменения в организме, что приводит к инвалидности, нередко к смерти.
Первичный сифилис
Первым признаком сифилиса является сифилитический аффект, образующийся на месте проникновения спирохеты. В основном первичные признаки сифилиса проявляются в виде шанкра (небольшие, глубокие язвы округлой формы). Шанкры возникают из одной папулы на слизистом или кожном покрове и вскоре плотный, красный бугорок быстро укрывается язвами. Иногда, кожа на шанкре выглядит как эрозия или просто царапина. Нередко первичный очаг сифилиса протекает незаметно или не возникает вообще.
Характерным симптомом сифилиса первичного периода является воспаление лимфатических узлов, которые расположены ближе к пораженному месту. Чаще всего реакция на бактерии сифилиса видна на слизистых. В случае поражения слизистой рта, воспаляются шейные лимфатические узлы, при возникновении шанкра в области половой системы воспаляются паховые лимфоузлы. Шанкр на слизистой полового члена может сопровождаться отеком.
Сочетание первичного сифилитического аффекта и воспалительного процесса в лимфоузлах в медицине называют первичным сифилитическим комплексом. Некоторые симптомы могут проходить без лечения. Шанкр оставляет на теле лишь небольшой рубец. Часто больные реагируют на такое явление как на выздоровление и не сообщают о прошедшем недуге врачу. Это заблуждение позволяет сифилису продолжать распространятся в крови и лимфе, поражая все органы.
Вторичный сифилис
Самый явный признак сифилиса вторичного периода — это кожно-слизистые высыпания, и симптомы, которые характерны простудным заболеваниям (повышается температура до 38°, ощущается слабость, насморк, сопровождающийся конъюнктивитом). Все высыпания характерны для сифилиса вторичного периода, их обозначают как сифилиды. Выделяют три формы таких высыпаний: розеолы, папулы и пустулы.
Главными отличительными чертами форм высыпаний вторичного сифилиса есть интенсивность воспалительного процесса и преобладание в нем экссудативного или некритического характера.
Проявления вторичного сифилиса
Сифилитическая розеола — это бледно-розовые пятна округлой или неправильной формы, маленькие в размере (не больше чечевицы) и на ощупь не отличаются. Розеолам не свойственно шелушение. Пятна располагаются на теле рассеянно, при надавливании на некоторое время исчезают, затем проявляются снова. В случае отсутствия лечения сходят спустя две или три недели, меняя при этом цвет на желтовато-красный. Сифилитическую розеолу считают одной из наиболее распространенной среди сифилидов. Пораженная кожа временами может отчищаться, но без лечения симптомы возвращаются в различных формах проявления. Розеола неоднократно может рецидивировать, ей характерны пятна разных размеров (до величины с монету). Чаще всего у больных сифилисом на вторичном периоде наблюдается сыпь в форме влажных или сухих папул. Среди сухих папул самой распространенной формой является чечевицеобразная (лентикулярная) форма. Она имеет округлые очертания, плотная и объемная. Высыпания появляются на коже в течение трех недель и сохраняются до трех месяцев.
Некоторые формы папул возникают на коже, богатой сальными железами. На лице высыпания локализуются на лбу, висках и носогубных складках, они покрываются жировым слоем и чешуйками. Исчезают папулы, когда прекращается шелушение, они выглядят как коричневые пятна, которые постепенно пропадают. В основном папулы возникают на боках туловища, на шее (образуя «ожерелье Венеры»), на лбу, по контуру волос, по поверхностям ладоней и стоп.
Волнообразное течение сифилиса просматривается во всех периодах с момента заражения. Проявление симптомов вторичного сифилиса длится какое-то время, но не превышает двух недель. Пятнистая сыпь при этом постепенно бледнеет и исчезает, параллельно исчезают недомогание, конъюнктивит, насморк и снижается температура. Через некоторое время симптомы заново проявляются.
Иногда, во вторичный период, симптомы практически не проявляются или инфицированный не замечает их. В таких случаях сифилис с вторичного периода переходит в самую тяжелую стадию заболевания — третичный сифилис.
Третичный сифилис
Между третичным и вторичным периодами сифилиса часто возникает стадия скрытого заболевания, в период которого организм борется с распространением и прогрессом болезни. Результат, в основном, зависит от иммунитета больного, при сильном, здоровом иммунитете третичный период может не наступить.
В основном от него страдают при отсутствии лечения и люди со слабым иммунитетом: старики, дети (при врожденном сифилисе), больные с хроническими заболеваниями (алкоголизм, туберкулез). При третичном периоде сифилиса изменения в организме происходят во всех жизненных системах организма и органах.
Выделяют некоторые повреждения систем организма: повреждение сердечно-сосудистой, центральной и нервной (нейросифилис) систем и деструктивные повреждения (резины). Резина — воспалительные гранулемы, которые способны поражать любые ткани органов и кости. Встречаются и другие подобные воспалительные очаги. Например, гуммозный инфильтрат из-за вязкой, напоминающей клей структуры, носит название гуммы. Такие образования часто встречаются на органах вместе.
Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)
ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.
Базируется данный анализ на копировании коротких участков ДНК бледной спирохеты, который удовлетворяет заданным параметрам и присутствует в образце. Всё это выполняется в искусственных условиях (in vitro). Реакция проводится в приборе — амплификаторе, который обеспечивает периодизацию температурных циклов. Происходит охлаждение с последующим нагреванием пробирок с погрешностью в 0,1˚С.
ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними. В стадии отжига температуру реакции снижают для связывания праймера с одноцепочечной матрицей.
Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.
ПЦР-диагностика сифилиса пока носит экспериментальный характер, но оправдана при выявлении врождённой инфекции, в сложных диагностических случаях или при минимальном содержании бледных трепонем в исследуемом материале.
ДНК-гибридизация
ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко. Если комплементарное соответствие частичное, то объединение цепочек ДНК происходит медленно. На основании времени слияния цепей можно оценить степень комплементарности.
При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.
Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.
Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.
ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество — позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.
Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».
Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.
Нетрепонемные тесты
Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.
Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.
Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.
Недостатки:
- 1Минимальная чувствительность в стадии сифилиса первичного – 70%;
- 2Минимальная чувствительность в стадии сифилиса позднего – 30%;
- 3Возможность появления ложноотрицательных и ложноположительных результатов;
- 4Трудоёмкость выполнения РСК.
Преимущества:
- 1Относительно маленькая стоимость производства тестов;
- 2Получение быстрого ответа;
- 3Возможность их применения для скрининга.
Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:
- 1Нарушение технологии выполнения, при блокировании комплекса АГ-АТ.
- 2Наличие у больного аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артирит, ревматизм, склеродермия, системная красная волчанка, саркоидоз и др.).
- 3Злокачественные новообразования.
- 4Вирусные и бактериальные инфекции.
- 5Эндокринные заболевания (аутоиммунный тиреоидит, сахарный диабет).
- 6Беременность.
- 7Употребление алкоголя.
- 8Приём жирной пищи.
- 9Старческий возраст.
Как видно из списка, существует достаточно причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).
Реакция связывания комплемента (РСК, Вассермана, RW)
Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.
Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.
При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.
Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.
Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.
Реакция микропреципитации
Так как трудоёмкость выполнения вышеуказанных проб велика, то для широты обхвата диспансеризацией разных групп населения разработан ускоренный способ серодиагностики сифилиса, так называемый экспресс-метод – реакция микропреципитации (сокращенно МР, РМП).
Она выполняется с кардиолипиновым антигеном и вспомогательными веществами. Его преимуществом является забор периферической крови для исследования. Это значительно ускоряет и саму методику, и работу лаборантов.
Рисунок 2 — Реакция микропреципитации (схема)
Для проведения МР необходимы плазма или инактивированная сыворотка крови пациента (именно они содержат антитела). Далее плазму помещают в маркированные лунки. Затем, к исследуемому материалу добавляют каплю кардиолипинового антигена, смешивают и встряхивают. В итоге в сыворотке инфицированного появляются характерные хлопья, разные по степени интенсивности.
Это качественная проба. При количественной оценке используются 10 разведений сыворотки, помещаемой в 10 лунок с соответствующей маркировкой. При качественной МР ответ указывается в виде крестов (плюсов) или минуса, при количественной указывается титр антител (1:2, 1:4 и так далее).
Наличие хлопьев расценивается как положительный или слабоположительный ответ. Возможно появление флокулята и при отсутствии заболевания, поэтому окончательную оценку полученного результата проводят после контрольного исследования или проведения других реакций (РИБТ, РИФ, ИФА, РПГА).
VDRL
Рекомендованный Всемирной организацией здравоохранения метод постановки реакции с антигеном липоидной природы (АГ) по праву считается лучшим среди других стандартных нетрепонемных тестов. Разработан в США, штате Джорджиа в лаборатории венерических болезней (Veneral Diseases Research Laboratories).
Аббревиатура учреждения послужила названием для пробы – VDRL. VDRL — это модификация МР. Сыворотку от больного сифилисом инактивируют и помещают на предметное стекло. Используемый антиген состоит из кардиолипина, холестерина и лецитина в разном процентном соотношении. Ответ регистрируется практически сразу.
Отчётливая флокуляция возникает в присутствии в сыворотке антител. Сыворотка становится реактивна по прошествии 4-х недель после заражения. Для оценки количества антител, сыворотку предварительно разводят в геометрической прогрессии.
Преимущества VDRL:
- 1сравнительно высокая чувствительность;
- 2сравнительно высокая специфичность;
- 3легкость выполнения;
- 4малая стоимость реактивов;
- 5получение быстрого ответа.
Недостатком VDRL является относительно высокая частота ложноположительных результатов.
Их причинами являются всё те же перечисленные выше заболевания.
Трепонемные тесты исполняются со специфическими АГ Treponema pallidum. Они необходимы и обязательны для установления окончательного диагноза. Это реакция иммунофлюоресценции (РИФ), реакции непрямой гемагглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА) и др.
После положительного результата нетрепонемного теста (RPR, MP, VDRL) всегда должны выполняться трепонемные (чаще комбинация — РПГА, ИФА, РИФ).
Трепонемные тесты более сложны в исполнении, чем экспресс-тесты, и требуют больших затрат денежных средств.
РИФ
Данная реакция (сокращенно РИФ) используется для диагностики сифилиса, в том числе и скрытых форм, и перепроверки положительных и ложноположительных проб.
РИФ основана на свечении меченых антител при соединении с комплексом антиген-антитело под кварцевой лампой. Метод начал применяться в 60-х годах и отличался простотой выполнения и высокой специфичностью (которая немного уступает РИБТ).
Он имеет несколько модификаций: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-abs.
Наиболее чувствительна РИФ в разведении 10 раз, а остальные — более специфичны. РИФ проводится в двух фазах. К АГ добавляют сыворотку крови пациента. Образуется комплекс АГ-АТ, который исследуется в следующей фазе. Далее меченный с помощью флюоохрома комплекс идентифицируют при микроскопии. Если не наблюдается свечение, это указывает на отсутствие специфических АТ в сыворотке крови.
РИФ-200 является наиболее ценным из всех разведений. Метод предназначен для диагностики различных форм сифилиса, особенно скрытого сифилиса и перепроверки положительных проб.
Подробное описание исследования
Сифилис — это инфекционная патология, относящаяся к группе ЗППП и являющаяся системной инфекцией — чаще всего поражается кожа и слизистые оболочки.
Возбудитель — грамотрицательная бактерия Treponema Pallidum из порядка Spirochaetales. Для нее возможны несколько путей передачи: половой (незащищенный половой контакт с зараженным человеком), трансплацентарный (от инфицированной матери к ребенку), контактно-бытовой (через предметы обихода — встречается редко) и гемотрансфузионный (при заражении донора сифилисом).
Как и любое другое инфекционное заболевание, течение сифилиса проходит несколько периодов. Всего их четыре:
- Инкубационный период: продолжается с момента инвазии — в зависимости от пути передачи, чаще через слизистые оболочки или поврежденную кожу — до возникновения симптомов (образование шанкра). В среднем этот период длится от 2-х недель до 2-х месяцев.
- Первичный сифилис: этот период характеризуется появлением язвы на коже или слизистой оболочке (твердого шанкра) на месте внедрения возбудителя, а затем увеличения лимфоузлов в этой области.
- Вторичный сифилис: чаще всего его проявления начинают наблюдаться через 6-8 недель после образования твердого шанкра. Этот период характеризуется появлением сифилидов — множественных высыпаний на коже и слизистых, имеющих различный характер. Могут поражаться внутренние органы, нервная система, суставы.
- Третичный сифилис: встречается крайне редко на сегодняшний день, может возникнуть спустя 2-3 года после инфицирования. Как правило, такие больные получают неадекватную или неполноценную терапию, часть из них не получала ее вообще. Для этого периода характерно появление гумм — крупных узлов в тканях, распадающихся и приводящих к выраженным косметическим дефектам. Отмечается прогрессирующее поражение нервной системы, опорно-двигательного аппарата, внутренних органов.
В настоящее время используются прямые и косвенные тесты для диагностики сифилиса. Прямые тесты предназначены для обнаружения возбудителя непосредственно из пораженного места. Косвенные тесты направлены на обнаружение антител против трепонемы в сыворотке крови. Когда патоген попадает в организм человека, его иммунная система реагирует синтезом антител. Антитела класса IgM появляются после заражения в среднем спустя 2 недели, а IgG — приблизительно через 4 недели.
Косвенные тесты подразделяются на трепонемные и нетрепонемные.
РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) входит в «трепонемные» тесты и используется для идентификации в сыворотке специфических антител к компонентам возбудителя. Этот тест чрезвычайно чувствителен и специфичен. При первичном сифилисе чувствительность теста достигает 76%, при вторичном сифилисе — 100%, при латентном сифилисе — 94-97%, специфичность же составляет 100%.
Механизм реакции связан с явлением агглютинации эритроцитов. Антигены (частицы) трепонемы находятся на мембране эритроцитов, к этой смеси добавляется сыворотка крови пациента. В присутствии антител наблюдается агглютинация (склеивание) эритроцитов и их осаждение. Преимущества этой реакции в том, что она обнаруживает не только наличие антител, но и позволяет оценить их титр (по количеству осажденных эритроцитов). Любая положительная реакция может свидетельствовать о наличии инфекции, но ложноположительные реакции не исключаются. Как правило, в таких случаях титр антител невелик: их появление связано не с инфекцией, а с наличием у пациента в сыворотке крови аутоантител (может наблюдаться при системных заболеваниях соединительной ткани и т. д.).
РИБТ
Реакция иммобилизации бледных трепонем (сокращено РИБТ, РИТ) одна из сложных серологических проб, требующих значительных усилий и финансовых затрат. РИБТ применяют все реже, но актуальность ее сохраняется в диагностике скрытого сифилиса.
Большое значение она несёт в распознавании ложноположительных результатов у беременных женщин и основывается на иммобилизации бактерий в присутствии иммобилизинов – поздних антител.
Результат оценивается на процентном количестве (%) иммобилизированных трепонем с помощью специальной таблицы:
- 1От 0 до 20 — отрицательная проба.
- 2От 21 до 50 — слабоположительная проба.
- 3От 50 до 100 — положительная реакция.
Ложноположительные результаты также возможны при применении РИБТ. Так, неверный ответ возможен при инфицировании тропическими трепанематозами, а также, при туберкулёзе, циррозе печени, саркоидозе и пациентов старческого возраста.
Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)
Наиболее специфичный диагностический тест на сифилис. В сыворотке крови больных производится определение видеоспецифичных антител (иммобилизинов), которые обездвиживают бледные трепонемы в присутствии комплемента. С помощью микроскопа проводится подсчет доли утративших подвижность (иммобилизованных) бледных трепонем. Кровь методом РИБТ исследуют не ранее чем через 2 недели после окончания приема антибиотиков и других лекарственных средств.
Исследование крови методами РИБТ и РИФ выполняют для диагностики скрытого сифилиса. РИФ (10-ти кратное разведение сыворотки) позволяет поставить диагноз даже у тех пациентов, в исследованиях которых бледная трепонема не обнаруживается.
РПГА
Этот анализ крови на сифилис называется реакцией пассивной гемагглютинации (сокращенно, кровь на РПГА, ТРПГА).
Антиген для РПГА приготавливают из эритроцитов барана, покрытых фрагментами бледных трепонем (полученных от инфицированных кроликов (см. рисунок 4)). Для анализа используется венозная кровь (плазма или инактивированная сыворотка) пациента.
При добавлении антигена в сыворотку пациента с сифилисом происходит образование комплекса АГ-АТ, который приводит к агглютинации эритроцитов. агглютинация определяется субъективно врачом-лаборантом.
Рисунок 3 — Схема РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)
Проба оценивается как положительная при появлении агглютинатов равномерной розовой окраски. Окрашивание преципитата в красный свидетельствует об осаждении эритроцитов. РПГА является высокочувствительной и высокоспецифичной.
12.1. Реакция микрогемагглютинации
Она является упрощённым вариантом РПГА. Отличается от пробы, описанной выше, меньшим количеством антигена, разбавителя и сыворотки крови для выполнения реакции. Через 4 часа после инкубации сыворотки можно оценить пробу. Используется при скрининговых и массовых обследованиях на сифилис.
Как определить заражение сифилисом?
Сифилис – одно из самых распространенных венерических заболеваний, которое поражает внутренние органы, кожные покровы и центральную нервную систему. Существует возможность заражения сифилисом не только половым, но и бытовым путем: через посуду, постельное белье, предметы личной гигиены и другие вещи, которыми пользовались или к которым прикасались больные люди.
Чтобы определить, больны вы или нет, необходимо обратиться к врачу, который проведет осмотр и выпишет направление на анализы. Лабораторная диагностика выявляет возбудителя сифилиса – бледную трепонему. Материалом для исследования может быть как плазма крови, так и отделяемое из кожных высыпаний, иногда образцы, полученные при пункции лимфатических узлов. Но все же основным видами лабораторной диагностики сифилиса являются серологические анализы, в частности, анализ крови на сифилис.
Вы можете сдать кровь на определение возбудителя сифилиса несколькими методами (о выборе нужно советоваться с врачом):
- Реакцией Вассермана;
- Реакцией микропреципитации с кардиолипиновым антигеном — RPR;
- Иммуноферментным анализом крови (ИФА);
- Исследованием реакции иммунофлюоресценции (РИФ);
- Реакцией иммобилизации бледных трепонем (РИБТ).
- Анализом на реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА);
Иммуноферментный анализ
Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы. Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).
Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.
Рисунок 4 — Схема ИФА (иммуноферментного анализа)
Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.
Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)
Соединение бледных трепонем сыворотки крови с обработанными специальными методами бараньими эритроцитами. При наличии в сыворотке крови возбудителя сифилиса происходит агглютинация (склеивание и последующее осаждение) эритроцитов. Реагенты вносят в лунки специальных пластин, о результате реакции судят по окрашиванию. Агглютинат эритроцитов имеет темно-красный цвет и форму пятна или кольца.
Кровь на анализ нужно сдавать из вены, натощак (не менее 4 часов с последнего приема пищи). Не рекомендуется сдавать кровь после приема алкоголя, лекарственных препаратов, а также во время менструального цикла.
Редакция благодарит сеть клиник «МедЦентрСервис» за помощь в подготовке материала.
